1、胰酶消化。消化完毕用之前收集的培养基中止消化。离心后PBS再洗一遍。离心，弃上清，细胞沉淀中加入70% 4度预冷的乙醇（PBS配制），4度放置不少于1小时（有的文献说是不少于15分钟）。之后离心去乙醇，PBS洗一遍后加入PI和DNAse，终浓度50 ug/ml，混匀，避光室温放置30 min后即可上流式细胞仪测定。
2、消化细胞 ，将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。CO2培养箱中培养48小时，使细胞长在盖片上。取出盖片，按下列顺序操作：PBS漂洗3分钟→甲醇：冰醋酸=3：1固定液中固定30分钟→Giemsa液染色10分钟→自来水冲洗。盖片晾干后反扣在载玻片上，镜检。
3、培养或分离的细胞约110 6，离心沉淀后用0.3ml含10％小牛血清的PBS悬浮，移入5mlEP管中，加入0.7ml无水乙醇，置－20摄氏度下固定细胞24小时以上（用本法制定的细胞可以在－20摄氏度下保存一周甚至更长的时间）。
4、一般都要在培养瓶中长满才可以运输。因为细胞在运输过程中由于外界不是处于最佳生存状态，因此细胞会逐渐凋亡。运输如果时间久，长满的细胞都会全部死亡，如果刚复苏出一天，细胞不会那么快的爬满整个培养瓶，更容易凋落死亡。
5、流式细胞仪凋亡分析/： 在6孔板中接种细胞，观察并区分活细胞、早期凋亡等不同阶段，揭示细胞生命周期的动态变化。
6、测细胞凋亡，贴壁细胞dapi染色，最好是固定。DAPI溶液是半通透性的，不固定的话，细胞染色时间得长，染料进入细胞会比较少，所以建议是固定。DAPI 可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。DAPI溶液使用步骤：固定细胞或组织样品，经过固定后，适当洗涤除去固定剂。
1、检测凋亡的流式方法很多，就算是BD的机子，型号也很多，所以操作差别很大。不过原则都是一样的。
2、流式检测细胞凋亡的原理 Annexin V和PI双染法是流式检测细胞凋亡的经典方法 ，它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine， PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的（如下图3）。
3、晚期凋亡的细胞由于DNA的断裂，因而可以出现DNA ladder，从而也就有了经典的检测方法TUNEl。流式也能进行Tunel检测，其检测原理与经典Tunel原理基本一致。以BD公司的为例，其利用TdT能将荧光素标记的dUTP标记到断裂的DNA末端，从而使凋亡的细胞具有荧光。
4、需要在散点图上先画出4个象限，位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂，在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。
5、流式细胞仪（flow cytometer）3 应用 4 参见 [编辑]原理 一束单色光（通常是激光）照到流体力学聚焦的一股流体上。若干个检测器瞄向流束和激光相交的这个点，其中一个和激光在同一直在线（称作前散射（FSC），其它几个和激光垂直（旁散射（SSC）和一个或几个荧光监测器）。
1、流式图四个象限看凋亡：在二维散点图上，PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞，annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞，而双染是凋亡中期的。需要在散点图上先画出4个象限，位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。
2、Q1：（AnnexinV-FITC）-/PI+，此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中，甚至机械损伤的细胞也包含其中。Q2：（AnnexinV+FITC）+/PI+，此区域的细胞为晚期凋亡细胞。Q3：（AnnexinV-FITC）+/PI-，此区域的细胞为早期凋亡细胞。Q4：（AnnexinV-FITC）-/PI-，此区域的细胞为活细胞。
3、左下为正常细胞，左上为坏死细胞；右上为晚期凋亡细胞，右下为早期凋亡细胞。检测CD4和CD8，应该还要同时染色CD 先选中CD3阳性的细胞（T细胞），把T细胞在CD4/CD8的散点图上再显示，可以分为四个象限。分别代表CD4阳性，CD8阳性，双阳性，和无染色的。
4、这四个缩写分别表示细胞凋亡流式图中十字坐标划分的四个区域，UL是上左（为碎片及损伤细胞），UR是上右（为晚期凋亡及死亡细胞），LL是下左（为阴性对照的正常细胞），LR是下右（为早期凋亡细胞）。
5、如下图所示：细胞可以分为4个象限：图4：4个象限的细胞分布图 举例：如常用于研究药物或者基因等对细胞凋亡的影响。 通过比较Control组和药物组，发现化合物可以诱导前列腺癌细胞系PC-3M的细胞凋亡，处理组（20μM）的晚期凋亡细胞比例与Control组（0μM）相比，从79%上升到139%。
用PI单染就可以，PI是用来测细胞周期的，在单倍体峰前如果有个亚峰则表明有凋亡，但是这个方法不是很好，坏死细胞也会包含在内。准确地说用PI单染测出的凋亡率应该是死亡细胞占细胞总数的比例。建议用AnexinV和PI双染，PI阴性和AnexinV阳性区是真正凋亡的细胞。
Q3（LR）：（AnnexinV-FITC）+/PI-，此区域的细胞为早期凋亡细胞。Q4（LL）：（AnnexinV-FITC）-/PI-，此区域的细胞为活细胞。通常统计细胞凋亡率时采用Q2+Q3，晚期凋亡＋早期凋亡群（即所有AnnexinV阳性群）。细胞周期由G1期、S期、G2期和M期组成。
流式图四个象限看凋亡：在二维散点图上，PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞，annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞，而双染是凋亡中期的。需要在散点图上先画出4个象限，位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。